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浅析“分光光度法测PHMG含量”操作的控制要点
来源: | 作者:上海高聚生物科技有限公司 --黄文华,蒋文彪 | 发布时间: 2021-09-16 | 340 次浏览 | 分享到:

摘要:简要介绍了《GB/T 26367-2020胍类消毒剂卫生要求》附录B.1中利用可见分光光度计测量PHMG(聚六亚甲基胍)含量的方法,并分析总结了PHMG含量检测过程中的操作及控制要点,通过控制可控因素以降低系统误差,提高检测结果的稳定性。根据实际操作发现,保持各平行组之间操作条件、可控变量的一致性很有必要。

关键词:GB/T 26367PHMG含量,分光光度法,控制要点

GB/T26367-2020胍类消毒剂卫生要求》附录B.1中利用可见分光光度计测量PHMG含量的原理,是PHMG水溶液与曙红混合会发生显色反应,随PHMG浓度的提高混合液颜色会变深,在波长545nm处测得的吸光度值与PHMG浓度线性关系。选用纯水作为空白对照246810 mg/LPHMG水溶液作为标准序列,皆加入醋酸钠溶液和曙红指示液后,测定吸光度值,绘制标准曲线;再将待测样品稀释至PHMG浓度在2~10mg/L的区间内,测定吸光度值、根据标准曲线计算PHMG含量。[1]

用该方法测定PHMG含量时,根据分析归纳和实际操作经验发现,引起误差的因素很多。根据多次对比实验发现,可研究、控制的要点有:

1. 方法适用范围

①本方法利用的是显色反应,如样品溶液本身有颜色或有悬浮物,则需要根据实际实验结果鉴别是否仍适用于本方法。[2]

②该方法适用于PHMG的单方消毒剂,是否适用于PHMG复方消毒剂也需要根据实验结果鉴别。例如,实验发现PHMG与苯扎氯铵以51摩尔比复配后,数次测定出的PHMG含量仍在消毒剂含量波动的允许范围(90%~110%)内,理论上也可用本方法。

2. 比色皿(比色杯)的选择

①比色皿规格,按照标准所述选择125px比色皿;

PHMG与曙红的混合液会在比色皿内表面着色残留,采用同一个比色皿连续取样测试时,实验发现某些组别测得的吸光度值显著偏高,干扰数据的准确性和稳定性。因此建议实验前先准备一整套的、用洗液彻底清洗干净的(全新的一套比色皿最佳)比色皿进行编号,各组吸光度值的测量都采用同一套、不同编号的干净比色皿进行测试。如同一组实验中比色皿必须重复使用,则该比色皿一定要用洗液彻底清洗干净后,才可作重复测试使用。

545nm在可见光波长范围内,因此选用玻璃或石英比色皿均可。由于石英比色皿价格昂贵,而本方法建议准备一整套的干净比色皿,因此选用玻璃比色皿即可。

3. 吸光度值的稳定性

根据实际操作发现,PHMG与曙红混匀后,吸光度值会随着时间的延长而逐渐降低,且十分钟以后仍不能稳定下来。在2min内吸光度值的降低幅度并不显著,皆以混匀后2min时测得的吸光度值进行实验时,测量准确度和稳定性很好,5次实验中,含量测定结果均在实际含量的97%~105%之间标准曲线的R2值均可保持在0.997以上,最高可达0.9996(以该组数据为例,PHMG浓度与吸光度值如表1,标准曲线如图1

1


PHMG浓度(mg/L

0

2

4

6

8

10

吸光度值

0

0.049

0.096

0.147

0.194

0.238

 

 

1 标准曲线

但当时间延长至5min以上时,吸光度值降低幅度较大,数据准确度和稳定性也大受干扰。因此建议统一保持在混匀后2min内测量吸光度值。在实际操作时,依次添加纯水、PHMG标准液、醋酸钠溶液后,选择在最后一步加入曙红指示液,且立即混匀、测量该组吸光度值,以保持每有一组加入曙红指示液后都能在混匀后2min内检测该组吸光度值。

4. 纯水空白组的处理

①空白实验是指在不加入待测试样的情况下,和试样分析组按照同样的操作步骤、条件进行的实验,以扣除因纯水、试剂和器皿等带进杂质所造成的系统误差,因此纯水空白组也需要加入醋酸钠溶液和指示液,这一点需要注意;纯水组测试吸光度值,进行调零。

PHMG的标准序列为246810mg/L,之后加入醋酸钠溶液和指示液后,溶液从10ml稀释至25ml。标准曲线绘制时,“0,0”点也应参与回归,但曲线不须强制截距为0

5. 待测样品的稀释

应预估样品的PHMG含量,以便稀释至标准曲线的浓度范围内(2~10mg/L)。实验发现,将待测样品稀释至PHMG含量为246810mg/L后分别测量吸光度值、按照同一个标准曲线进行计算,测出的PHMG含量值之间偏差极小,因此无须预先稀释至某个特定浓度,只需在2~10mg/L的区间范围内即可。

6. 其它因素

一些通用的注意事项,如仪器必须预热,操作时不能触碰到比色皿的透光表面,比色皿的透光表面如有溶液应擦干,以及光源光压是否稳定,光电池或光电管是否老化等。[3]

7. 结语

分光光度计法是同时涉及光学、精密器械和电子技术的光谱仪器,涉及的干扰因素多,需要小心对待、谨慎处理,根据原理和实际操作经验来控制好变量、减小系统误差,提高准确度和可靠度。通过对比实验发现,保持各平行组之间操作条件、可控变量的一致性很有必要,如比色皿规格、成套性、洁净程度,以及加入曙红指示液混匀后测量的时间,控制好后都可以有效降低或消除部分系统误差。

[参考文献]

[1]GB/T26367-2020 胍类消毒剂卫生要求.

[2]郑杭生,李计萍,韩炜,张永文.紫外-可见分光光度法测定总黄酮含量的方法学考察要点[J].中成药,2008,{4}(09):1364-1365.

[3]娄红杰.研究引起分光光度计误差的因素[J].中国新技术新产品,2013,{4}(05):13.


    
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