摘要：简要介绍了《GB/T 26367-2020胍类消毒剂卫生要求》附录B.1中利用可见分光光度计测量PHMG（聚六亚甲基胍）含量的方法，并分析总结了PHMG含量检测过程中的操作及控制要点，通过控制可控因素以降低系统误差，提高检测结果的稳定性。根据实际操作发现，保持各平行组之间操作条件、可控变量的一致性很有必要。

关键词：GB/T 26367，PHMG含量，分光光度法，控制要点

《GB/T26367-2020胍类消毒剂卫生要求》附录B.1中利用可见分光光度计测量PHMG含量的原理，是PHMG水溶液与曙红混合会发生显色反应，随PHMG浓度的提高混合液颜色会变深，在波长545nm处测得的吸光度值与PHMG浓度成线性关系。选用纯水作为空白对照，以2、4、6、8、10 mg/L的PHMG水溶液作为标准序列，皆加入醋酸钠溶液和曙红指示液后，测定吸光度值，绘制标准曲线；再将待测样品稀释至PHMG浓度在2~10mg/L的区间内，测定吸光度值、根据标准曲线计算PHMG含量。^[1]

用该方法测定PHMG含量时，根据分析归纳和实际操作经验发现，引起误差的因素很多。根据多次对比实验发现，可研究、控制的要点有：

1. 方法适用范围

①本方法利用的是显色反应，如样品溶液本身有颜色或有悬浮物，则需要根据实际实验结果鉴别是否仍适用于本方法。^[2]

②该方法适用于PHMG的单方消毒剂，是否适用于PHMG复方消毒剂也需要根据实验结果鉴别。例如，实验发现PHMG与苯扎氯铵以5：1摩尔比复配后，数次测定出的PHMG含量仍在消毒剂含量波动的允许范围（90%~110%）内，理论上也可用本方法。

2. 比色皿（比色杯）的选择

①比色皿规格，按照标准所述选择125px比色皿；

②PHMG与曙红的混合液会在比色皿内表面着色残留，采用同一个比色皿连续取样测试时，实验发现某些组别测得的吸光度值显著偏高，干扰数据的准确性和稳定性。因此建议实验前先准备一整套的、用洗液彻底清洗干净的（全新的一套比色皿最佳）比色皿进行编号，各组吸光度值的测量都采用同一套、不同编号的干净比色皿进行测试。如同一组实验中比色皿必须重复使用，则该比色皿一定要用洗液彻底清洗干净后，才可作重复测试使用。

③545nm在可见光波长范围内，因此选用玻璃或石英比色皿均可。由于石英比色皿价格昂贵，而本方法建议准备一整套的干净比色皿，因此选用玻璃比色皿即可。

3. 吸光度值的稳定性

根据实际操作发现，PHMG与曙红混匀后，吸光度值会随着时间的延长而逐渐降低，且十分钟以后仍不能稳定下来。在2min内吸光度值的降低幅度并不显著，皆以混匀后2min时测得的吸光度值进行实验时，测量准确度和稳定性很好，5次实验中，含量测定结果均在实际含量的97%~105%之间标准曲线的R²值均可保持在0.997以上，最高可达0.9996（以该组数据为例，PHMG浓度与吸光度值如表1，标准曲线如图1）。

表1

图1 标准曲线

但当时间延长至5min以上时，吸光度值降低幅度较大，数据准确度和稳定性也大受干扰。因此建议统一保持在混匀后2min内测量吸光度值。在实际操作时，依次添加纯水、PHMG标准液、醋酸钠溶液后，选择在最后一步加入曙红指示液，且立即混匀、测量该组吸光度值，以保持每有一组加入曙红指示液后都能在混匀后2min内检测该组吸光度值。

4. 纯水空白组的处理

①空白实验是指在不加入待测试样的情况下，和试样分析组按照同样的操作步骤、条件进行的实验，以扣除因纯水、试剂和器皿等带进杂质所造成的系统误差，因此纯水空白组也需要加入醋酸钠溶液和指示液，这一点需要注意；纯水组测试吸光度值，进行调零。

②PHMG的标准序列为2、4、6、8、10mg/L，之后加入醋酸钠溶液和指示液后，溶液从10ml稀释至25ml。标准曲线绘制时，“0,0”点也应参与回归，但曲线不须强制截距为0。

5. 待测样品的稀释

应预估样品的PHMG含量，以便稀释至标准曲线的浓度范围内（2~10mg/L）。实验发现，将待测样品稀释至PHMG含量为2、4、6、8、10mg/L后分别测量吸光度值、按照同一个标准曲线进行计算，测出的PHMG含量值之间偏差极小，因此无须预先稀释至某个特定浓度，只需在2~10mg/L的区间范围内即可。

6. 其它因素

一些通用的注意事项，如仪器必须预热，操作时不能触碰到比色皿的透光表面，比色皿的透光表面如有溶液应擦干，以及光源光压是否稳定，光电池或光电管是否老化等。^[3]

7. 结语

分光光度计法是同时涉及光学、精密器械和电子技术的光谱仪器，涉及的干扰因素多，需要小心对待、谨慎处理，根据原理和实际操作经验来控制好变量、减小系统误差，提高准确度和可靠度。通过对比实验发现，保持各平行组之间操作条件、可控变量的一致性很有必要，如比色皿规格、成套性、洁净程度，以及加入曙红指示液混匀后测量的时间，控制好后都可以有效降低或消除部分系统误差。

[参考文献]

[1]GB/T26367-2020 胍类消毒剂卫生要求.

[2]郑杭生,李计萍,韩炜,张永文.紫外-可见分光光度法测定总黄酮含量的方法学考察要点[J].中成药,2008,{4}(09):1364-1365.

[3]娄红杰.研究引起分光光度计误差的因素[J].中国新技术新产品,2013,{4}(05):13.